连花清瘟如何抑制新冠？最新研究发现大黄酸等(2)

　　平衡解离常数KD值越大意味解离越多，候选成分与 ACE2的亲和力越弱。研究发现，苦杏仁苷(Amygdalin)和野黑樱苷(Prunasin)具有较强的ACE2结合亲和力，KD 值分别为0.221和0.268 μmol/L。野黑樱苷是苦杏仁苷在体内主要的代谢物，在人血清中的暴露量很高。

表1.通过SPR分析获得的靶向ACE2蛋白的候选活性成分的亲和力。 论文附图

　　甘草甜素(glycyrrhizin)曾被认为是新冠肺炎的有效治疗药物，具有潜在的ACE2结合活性。这项研究确认了甘草甜素的KD值为4.39 μmol/L。

　　连翘苷A(forsythoside A)和连翘苷I(forsythoside I)是连翘果实中的主要成分，其对ACE2的亲和力被分别测定为15.8 and 18.7 μmol/L。大黄酸(rhein)是另一种在人血清中高暴露的组分，它对ACE2的亲和力适中，KD值为33.3 μmol/L.。

　　第二重筛选，研究团队进行了ACE2活性抑制试验，通过ACE2抑制剂筛选试剂盒，测试了候选成分对ACE2活性的影响。结果发现，与ACE2结合亲和力较强的两个组分野黑樱苷(prunasin)和甘草甜素(glycyrrhizin)，均未表现出明显的肽酶抑制作用，但是，大黄酸(Rhein)“表现突出”。

　　试验发现，大黄酸(Rhein)和大黄素-8-O-β-d-葡萄糖苷(emodin 8-O-β-d-glucoside)具有良好的ACE2抑制作用，IC50分别为18.33和22.50μmol/L，(如图1C所示)。值得一提的是，大黄酸(rhein)在人体内暴露程度高，具有良好的活性，这说明其可能是连花清瘟发挥ACE2抑制作用的主要活性成分。

　　图1.候选成分对ACE2酶活性的抑制作用。

　　(A)阳性药物MLN-4760

　　(B)连翘的候选成分

　　(C)大黄原植物

　　(D)金银花/烤苦杏仁/甘草根

　　论文附图

　　此外，试验结果还显示，三种连翘苷A、B和I，都具有ACE2抑制作用(如图1B所示)，三种绿原酸异构体均表现出中等程度的ACE2抑制活性，IC50都在40μmol / L左右(如图1D所示)。

　　研究团队认为，连翘苷A和I，新绿原酸及其异构体，都具有良好的体外活性，但体内暴露低，它们可能与大黄素发挥协同作用。这或许反映了中药的协同效应。

　　第三重筛选，研究团队进行了分子对接实验，以研究6个代表性成分的结合位点。

　　实验发现，野黑樱苷(prunasin)、连翘苷I(forsythoside I)，甘草甜素(glycyrrhizin)，大黄酸(rhein)，连翘苷A(forsythoside A)和新绿原酸(neochlorogenic acid)这6种具有强亲和力的组分，都能与ACE2和新冠病毒S蛋白结合界面形成恰当的空间互补(如图2A-F所示)。

　　图2.(A)野黑樱苷、(B)连翘苷I、(C)甘草甜素、(D)大黄酸、(E)连翘苷A、(F)新绿原酸的分子对接结果。 论文附图

　　图2.(A)野黑樱苷、(B)连翘苷I、(C)甘草甜素、(D)大黄酸、(E)连翘苷A、(F)新绿原酸的分子对接结果。 论文附图

　　此前，大黄酸显示出了最佳的ACE2抑制作用，分子对接则证明其羧基可与关键的肽酶活性位点Ala387结合，形成氢键。在大黄素-8-O-β-d-葡萄糖苷也观察到了同样的情况。

　　最终，三层筛选全部命中的4种候选活性成分为，大黄酸，连翘苷A、连翘苷I、新绿原酸及其异构体。

　　研究团队总结道，这些成分不仅对ACE2表现出良好的亲和力，而且能有效地结合到ACE2与S蛋白复合体的接触面上；通过显著影响新冠病毒S蛋白和人受体ACE2间的结合，其可能发挥抑制新冠病毒的潜在作用，这是防止病毒感染的重要途径。

　　中西医的碰撞，解密连翘与大黄

　　早在疫后初期，连花清瘟就被应用于新冠肺炎的临床治疗，入选中药抗疫的“三药三方”，并被列入《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第四至八版)》。

　　连花清瘟的组方有13味中药，连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天、薄荷脑、甘草。